система онлайн-бронирования
г. Донецк, Украина, ул. Артёма, 87
+38 (062) 332 33 32, 332-27-71
ЗАБРОНИРОВАТЬ
НОМЕР

Статьи

Механизм (ы) токсического действия Zn2 + и селенита: исследование клеток гепатомы AS-30D и изолированных митохондрий

  1. 3.1. AS-30D Асцитные клетки гепатомы крысы 3.1.1. Действие Zn2 + и селенита на жизнеспособность клеток
  2. Таблица 1
  3. 3.1.2. Действие Zn2 + и селенита на ΔΨmito
  4. Таблица 2
  5. 3.1.3. Действие Zn2 + и селенита на клеточное дыхание
  6. Таблица 3
  7. 3.1.4. Действие Zn2 + и селенита на внутриклеточную продукцию АФК
  8. Таблица 4
  9. 3.2. Митохондрия печени крысы
  10. 3.3. Заключительные замечания

3.1. AS-30D Асцитные клетки гепатомы крысы

3.1.1. Действие Zn2 + и селенита на жизнеспособность клеток

Сначала мы изучали дозовую и временную зависимость действия Zn2 + и селенита на жизнеспособность клеток AS-30D. Мы обнаружили, что высокие концентрации селенита (50 мкМ) и Zn2 + (250 и 500 мкМ) убивали клетки AS-30D в зависимости от времени как некротическим, так и апоптическим путем (см. Рисунки и, соответственно). В то же время 10–50 мкМ Zn2 + и 0,1–5 мкМ селенита не вызывали ни некротической (), ни апоптотической () гибели клеток AS-30D при использованных инкубационных периодах. Таким образом, основной целью следующих экспериментов было подчеркнуть молекулярные механизмы цитотоксичности высоких концентраций мкМ Zn2 + и селенита.

Таким образом, основной целью следующих экспериментов было подчеркнуть молекулярные механизмы цитотоксичности высоких концентраций мкМ Zn2 + и селенита

Зависимое от времени и дозы действие Zn2 + и селенита на жизнеспособность клеток AS-30D оценивали с помощью теста на исключение трипанового синего. Время инкубации составляло 3, 24 и 48 часов. Результаты выражены в% к соответствующему контролю и представлены в виде средних значений четырех независимых экспериментов ± SE. * Р <0,05.

Индукция апоптоза в клетках AS-30D различными концентрациями Zn2 + и селенита. Клетки культивировали в среде RPMI 1640 без (контроль) или с указанной концентрацией (в мкМ) Zn2 + и селенита в течение 24 часов, окрашивали йодидом пропидия и анализировали проточной цитометрией. Процент фракции sub-G1, характерной для апоптотических клеток, указан в верхнем левом углу каждой панели. Типичный эксперимент из по крайней мере трех независимых для каждого соединения показан.

В связи с этим мы исследовали действие нескольких модуляторов поры перехода митохондриальной проницаемости (МРТ) (то есть неселективного высокопроводящего канала внутренней митохондриальной мембраны неизвестной структуры, открытие которого обеспечивает свободный проход в митохондрии молекул <1,5 кДа, включая протоны, которые, как обнаружено, участвуют во многих патологических состояниях и гибели клеток разных типов [ 21 - 24 ]) против Zn2 + - и селенит-индуцированного повреждения клеток AS-30D. Мы обнаружили, что CsA, мощный фармакологический ингибитор пор MPT, взятый в концентрации 1 мкМ, который не оказывает какого-либо значительного влияния на клетки AS-30D как таковой, частично предотвращает гибель клеток, измеренную после 24-часового воздействия на клетки высоким содержанием селенита или Zn2 + ().

Таблица 1

Действие циклоспорина А на гибель клеток AS-30D, вызванную высокими концентрациями Zn2 + и селенита.

Обработка (24 ч) 50 мкМ Se 250 мкМ Zn 500 мкМ Zn нет 27 ± 3 31 ± 5 17 ± 6 + CsA (1 мкМ) 41 ± 1 * 55 ± 5 ** 30 ± 6 **

Представляется важным сказать, что ранее мы сравнили токсическое действие концентраций Cd2 +, Hg2 + и Cu2 + в мкМ (т.е. 10, 50, 100 и 500 мкМ) на клетки асцитной гепатомы крысы AS-30D и обнаружили, что токсичность эти три иона металлов снизились с Hg2 + (наиболее токсично) до Cu2 + (наименее токсично) [ 10 ]. Hg2 + и Cd2 + вызывали высокий процент гибели клеток как при некрозе, так и при апоптозе, тогда как Cu2 + в концентрациях до 500 мкМ был слабо эффективен. Все металлы вызывали значительные изменения в функции митохондрий и внутриклеточной генерации АФК. Более того, наши данные показали, что одного повышенного уровня АФК недостаточно для индукции апоптотического и / или некротического распада клеток AS-30D. В случае Cd2 + и Hg2 + должны присутствовать дополнительные факторы, которые были / были ответственны за их цитотоксическое действие; скорее всего, это была блокировка дыхательной цепи митохондрий [ 10 ]. Мы также обнаружили, что вызванная Cd2 + цитотоксичность сопровождалась повышенным образованием АФК на уровне митохондриального дыхательного комплекса III и индукцией пор MPT ​​[ 9 ].

3.1.2. Действие Zn2 + и селенита на ΔΨmito

Для дальнейшего выяснения механизмов, лежащих в основе цитотоксичности высоких концентраций Zn2 + и селенита, мы изучили влияние этого металла / металлоида на ΔΨmito. Как видно из этого, после 3 ч инкубации клеток AS-30D с 50 мкМ селенита наблюдалось значительное снижение ΔΨmito (примерно на 30% по сравнению с контролем). В то же время, 500 мкМ Zn2 + вызывали более чем двукратное снижение ΔΨmito по сравнению с контролем. После 24 ч инкубации высокий уровень содержания Zn2 + и селенита вызывал тяжелую потерю Δ -mito клеток AS-30D (и). Следует отметить, что низкий уровень Zn2 + (50 мкМ) и селенита (1 мкМ) не вызывал каких-либо значительных изменений в ΔΨmito клеток AS-30D даже после 24-часовой инкубации с клетками ().

Действие различных концентраций Zn2 + и селенита на митохондриальный трансмембранный потенциал через 24 ч инкубации с клетками AS-30D. JC-1 представляет собой проникающий в клетки краситель, который накапливается в митохондриях, сохраняя высокое ΔΨmito, и изменяет свою эмиссионную флуоресценцию с зеленого на красный, за которым может следовать проточная цитометрия. Оценивали процент клеток с красной (R2) и зеленой (R3) флуоресценцией JC-1, отражающей высокий и низкий ΔΨmito соответственно; R2 указывается в верхнем левом углу каждой панели. Протонофорный разобщитель CCCP плюс ионофор калия валиномицин, действуя вместе, чтобы полностью разрушить ΔΨmito, всегда использовались в качестве «положительного» контроля. Типичный эксперимент из по крайней мере трех независимых показан.

Таблица 2

Влияние высоких концентраций Zn2 + и селенита на митохондриальный трансмембранный потенциал клеток AS-30D контролировали проточной цитометрией после окрашивания клеток липофильным катионным зондом JC-1.

Время 50 мкМ Se 250 мкМ Zn 500 мкМ Zn 3 ч 67 ± 11 * 55 ± 9 * 46 ± 2 * 24 ч 14 ± 3 * 13 ± 1 * 12 ± 4 *

Что касается Cd2 +, Hg2 + и Cu2 + [ 10 ], при измерении ΔΨmito в интактных клетках AS-30D мы обнаружили, что 50 мкМ Hg2 + вызывали полный коллапс ΔΨmito уже через 30 мин, а 10 мкМ Hg2 + вызывали сильное снижение ΔΨmito (около 80% по сравнению с контролем) уже через 3 ч выдержка с клетками. В течение этого короткого времени инкубации Cd2 + оказывал дозозависимый эффект, который становился статистически значимым только при концентрациях 100 мкМ и 500 мкМ. Cu2 + оказывал меньший ингибирующий эффект на ΔΨmito через 3 ч, который все еще был статистически незначимым для 100 мкМ. Cu2 + через 24–48 часов, в то время как 500 мкМ Cu2 + сильно подавил ΔΨmito через 48 часов.

3.1.3. Действие Zn2 + и селенита на клеточное дыхание

Чтобы затем выяснить механизм (ы) митохондриальной дисфункции, связанной с вредным воздействием Zn2 + и селенита, мы изучили их действие на клеточное дыхание. Как показано на рисунке, частота дыхания несвязанных клеток AS-30D, то есть в присутствии CCCP (см. Раздел 2 ), начал снижаться после 3 ч инкубации с 50 мкМ селенита, а через 48 ч его величина составила 20% от контроля. В случае высокого Zn2 + частота несвязанного дыхания клеток снижалась более чем в два раза уже через 3 часа и полностью ингибировалась после 48 ч инкубации с 500 мкМ Zn2 + (). В то же время низкие концентрации Zn2 + (10, 50 и даже 100 мкМ) и селенита (до 5 мкМ) не влияли на частоту дыхания несвязанных клеток AS-30D во все исследуемые периоды инкубации, в то время как 10 мкМ селенита после 48-часового воздействия на клетки значительно снижало частоту дыхания в разрозненном состоянии, которая составляла 80% от контроля (данные не показаны). Важно также отметить, что 50 мкМ селенита вызывали значительную (30%) стимуляцию частоты дыхания в покое (т.е. в присутствии олигомицина, см. Раздел 2 ) клеток AS-30D после 3-часовой инкубации, тогда как высокий Zn2 + (250 и 500 мкМ) значительно ингибировал клеточное дыхание в состоянии покоя, начиная уже с 3-часовой обработки. Все остальные концентрации тестируемого Zn2 + и селенита не оказывали значительного влияния на частоту дыхания в состоянии покоя клеток AS-30D. Следует отметить, что в случае высокого Zn2 + было получено только ингибирующее действие на дыхание клеток AS-30D в состоянии покоя, а также сильное ингибирующее влияние на частоту дыхания в разрозненном состоянии, что указывает на блокирование дыхательной цепи митохондрий.

Таблица 3

Влияние высоких концентраций Zn2 + и селенита на несвязанное дыхание клеток AS-30D. Частота несвязанного дыхания (при наличии CCCP) контрольных клеток принимается за 100%.

Время 50 мкМ Se 250 мкМ Zn 500 мкМ Zn 3 ч 86,4 ± 4,6 * 48,4 ± 7,2 * 28,3 ± 10,6 * 24 ч и 31,0 ± 5,0 * 10,7 ± 0,5 * 48 ч 20,8 ± 6,5 * 11,3 ± 1,3 * 1,9 ± 0,3 *

В свою очередь, до [ 10 ], мы обнаружили, что после 3 ч инкубации клеток AS-30D с 10 мкМ Hg2 + дыхание в состоянии покоя было слегка, но значительно увеличено, тогда как дыхание без сцепления оставалось неизменным, что указывало на слабое разобщающее действие этой низкой концентрации металла. Напротив, при 50 мкМ Hg2 + все три значения (то есть дыхание в стационарном состоянии, дыхание в состоянии покоя и несвязанное дыхание) были сильно подавлены, что указывает на мощный ингибирующий эффект на дыхательную цепь. При использовании Cd2 + при концентрации 100 мкМ наблюдалось уменьшение примерно на 30% несвязанного дыхания, а некоторый ингибирующий эффект можно было наблюдать уже при концентрации 50 мкМ. Дальнейшее увеличение концентрации Cd2 + до 500 мкМ усилило ингибирующий эффект. Напротив, Cu2 + не оказывал ингибирующего эффекта даже при концентрации 500 мкМ через 3 часа, но оказывал слабое разъединяющее действие, что проявлялось в увеличении частоты дыхания как в стационарном, так и в покое. После 24 ч инкубации клеток с соответствующим тяжелым металлом 50 мкМ Hg2 + и 50 мкМ Cd2 + вызывали практически полное угнетение клеточного дыхания, в то время как 50 мкМ Cu2 + оказывали выраженный разобщающий эффект; Более того, даже через 48 ч 50–100 мкМ Cu2 + не ингибировали клеточное дыхание, тогда как 500 мкМ Cu2 + уменьшали его до 70% или ниже.

3.1.4. Действие Zn2 + и селенита на внутриклеточную продукцию АФК

Как известно, внутриклеточная продукция АФК может быть важным показателем цитотоксичности исследуемых соединений. Как показано на рисунке, 50 мкМ селенита в три раза усиливали образование внутриклеточных АФК уже после короткого времени инкубации (50 мин и 3 ч), а через 24–48 ч они вызывали резкое снижение продукции АФК по сравнению с контролем. Напротив, высокие концентрации тестируемого Zn2 +, а именно 250 и 500 мкМ, не вызывали каких-либо значительных изменений в генерации АФК после 50 мин инкубации с клетками AS-30D. Тем не менее, высокий Zn2 + умеренно увеличивал образование внутриклеточных АФК через 3 часа и уменьшал их продукцию в два раза (по сравнению с контролем) через 24–48 часов инкубации с клетками (). Низкое содержание Zn2 + (50 мкМ) и селенита (до 5 мкМ) не изменило генерацию ROS клеток AS-30D после всех использованных периодов инкубации. Мы также обнаружили, что изменения внутриклеточной генерации АФК, наблюдаемые после инкубации клеток AS-30D с высоким содержанием Zn2 + или селенита, были ослаблены CsA ().

Действие циклоспорина А на изменения внутриклеточного образования АФК, продуцируемых высоким содержанием Zn2 + и селенитом в клетках AS-30D. (а) Se: 50 мкМ; 3 ч; (б) Zn: 250 мкМ; 24 ч. Клетки культивировали в среде RPMI 1640 без (контроль) или с указанной концентрацией (в мкМ) селенита и Zn2 + в течение 3 и 24 часов соответственно в отсутствие или в присутствии 1 мкМ CsA. Общая продукция ROS была рассчитана как среднее геометрическое значение общей зеленой флуоресценции продукта окисления DCFH2 и указано в верхнем правом углу каждой панели; для других деталей, см. Раздел 2 , Типичный эксперимент из по крайней мере трех независимых для каждого соединения показан.

Таблица 4

Зависимые от времени эффекты высоких концентраций Zn2 + и селенита на образование АФК клетками AS-30D, измеренные с помощью проточной цитометрии с использованием DCFH2-DA в качестве ROS-чувствительного зонда.

Среднее время флуоресценции DCF (произвольные единицы) Контроль 50 мкМ Se 250 мкМ Zn 500 мкМ Zn PBS 50 мин 32,8 ± 6,3 90,9 ± 3,1 * 38,5 ± 2,2 29,2 ± 9,5 об / мин 3 ч 21,1 ± 1,1 75,6 ± 2,5 * 31,6 ± 1,5 * 32,1 ± 1,8 * 24 ч 25,8 ± 4,3 4,2 ± 0,8 * 12,0 ± 1,0 * и 48 ч 21,7 ± 4,7 7,3 ± 0,7 * 11,8 ± 0,5 * nd

Следует упомянуть, что в нашей предыдущей работе о ячейках AS-30D [ 10 ] мы показали, что Cu2 + вызывает раннее и резкое увеличение генерации внутриклеточных АФК. В частности, Cu2 + в диапазоне 100–500 мкМ вызывал только стимуляцию образования АФК, которое начиналось уже через 30 мин инкубации с клетками; однако продуцирование ROS снизилось до уровня контроля после 48 ч инкубации клеток с 500 мкМ Cu2 +. Действие Hg2 + и Cd2 + на образование АФК было двухфазным. Они стимулировали выработку АФК в клетках при низких концентрациях и при коротком времени инкубации, но уменьшали выработку АФК при более высоких концентрациях и при более длительной инкубации.

3.2. Митохондрия печени крысы

Для дальнейшего понимания молекулярного механизма (механизмов) митохондриальной дисфункции, вызываемой тестируемым металлом / металлоидом, мы сравнили действие Zn2 + с эффектами селенита на изолированные митохондрии печени крысы, используемые в качестве модельной системы. С помощью O2, TPP +, K + и Ca2 + -селективных электродов был проведен одновременный мониторинг четырех параметров биоэнергетики - дыхания, потоков ΔΨmito, K + и Ca2 + - в присутствии изучаемого металла / металлоида и различных митохондриальных эффекторов. подчеркнуть причинно-следственные связи, лежащие в основе дисфункции митохондрий (рисунки и)

Одновременная регистрация четырех параметров митохондрий (дыхание, потоки ΔΨmito, K + и Ca2 +) с помощью O2, TPP +, K + и Ca2 + -селективных электродов после обработки изолированного RLM с Zn2 + в отсутствие (а) или в присутствии CsA ( б). Митохондрии (1 мг белка / мл) инкубировали при комнатной температуре в среде, содержащей 120 мМ NaCl, 2 мМ NaH2PO4, 10 мМ HEPES (pH 7,4), 5 мМ Glu и 5 мМ Mal. Добавки Zn2 + (5 мкМ), K + (100 мкМ), Ca2 + (200 мкМ) и дитионита указаны стрелками. [CsA] составляло 1 мкМ. 20 мкМ Ca2 + присутствовало в среде для анализа с начала эксперимента. Отклонение вниз указывает на уменьшение [O2], [TPP +], [K + free] и [Ca2 + free] в среде. Результаты являются репрезентативными для серии из двух независимых экспериментов.

Одновременная регистрация четырех параметров митохондрий (дыхание, потоки ΔΨmito, K + и Ca2 +) с помощью O2, TPP +, K + и Ca2 + -селективных электродов после обработки изолированного RLM селенитом натрия в отсутствие (a) или в присутствии CsA (б). Добавки Na2SeO3 (5 мкМ) указаны стрелками. Остаток как в.

Мы обнаружили, что в респираторной среде для анализа NaCl, где K + был заменен на Na + для мониторинга потоков K + в и из митохондрий (точное содержание среды см. В условных обозначениях), снижение ΔΨmito, высвобождение K + и Ca2 + и нарушение дыхания вызванные низким [Zn2 +] были сильно подавлены CsA, мощным ингибитором поры MPT (). Однако даже в присутствии CsA в среде для анализа после добавления Zn2 + наблюдалась медленная диссипация Ψmito (след 2). Также очевидно, что высвобождение Ca2 + из митохондрий было последним событием среди наблюдаемых в присутствии Zn2 + (след 4). Ранее в респираторной среде для анализа KCl мы наблюдали аналогичные изменения в ΔΨmito, вызванные Zn2 + (измеренные с помощью Rh123), которые снова были лишь частично чувствительными к CsA [ 11 ]. Ранее мы также обнаружили, что в среде KCl Zn2 + индуцировал резкое окисление пиридиновых нуклеотидов (PN), которое ингибировалось CsA, защитное действие которого, однако, было отменено увеличением нагрузки Zn2 +. Кроме того, митохондриальный отек, вызванный Zn2 + в KCl и сахарозной среде, замедлялся CsA и другими ингибиторами MPT [ 11 ].

Действие Zn2 + на функцию митохондрий очень напоминает эффекты Cd2 +, изученные нами ранее ([ 11 , 13 , 16 , 24 , 25 ] (см. также здесь), а именно, дыхательная дисфункция, потеря ΔΨmito, высвобождение K + и Ca2 +, изменения в окислительно-восстановительном состоянии митохондриального PN и отек матрикса, вызванный Cd2 +, были сильно ингибированы CsA. Тем не менее, даже в присутствии CsA в среде для анализа имела место медленная диссипация ΔΨmito Cd2 + (след 2). Более того, как и в случае Zn2 +, высвобождение Ca2 + было последним событием среди наблюдаемых после добавления Cd2 +; кроме того, защита CsA от вредного воздействия Cd2 + была устранена увеличением нагрузки на тяжелые металлы.

Одновременная регистрация четырех параметров митохондрий (дыхание, потоки ΔΨmito, K + и Ca2 +) с помощью O2, TPP +, K + и Ca2 + -селективных электродов после обработки изолированного RLM Cd2 + в отсутствие (а) или в присутствии CsA ( б). Добавки Cd2 + (5 мкМ) указаны стрелками. Остаток как в.

В случае селенита мы обнаружили, что не только высвобождение K + или Ca2 + (), но также потеря ΔΨmito, вызванная импульсами селенита как в NaCl (), так и в KCl [ 11 ] среда для анализа была полностью подавлена ​​CsA. То же самое относится и к Ca2 + -индуцированной ΔΨmito-диссипации (). Однако сильная длительная активация частоты основного митохондриального дыхания, обнаруженная в присутствии селенита, была лишь частично чувствительной к CsA (и следам 1). Как видно из этого, CsA восстанавливает способность поглощения Ca2 +, нарушенную обработкой селенитом (след 4). Следует отметить, что значительная длительная стимуляция дыхания покоя митохондрий, возбуждаемых Glu плюс Mal (то есть субстратами комплекса I mtETC) в присутствии селенита, также наблюдалась в среде для анализа KCl; кроме того, ранее мы обнаружили, что в этой среде селенит уменьшал как дыхание в St 3, так и стимулированное ДНП дыхание [ 11 ]. Как мы также показали, митохондриальное набухание, вызванное селенитом в среде KCl в присутствии Glu плюс Mal, было только частично восприимчивым к CsA, в отличие от Ca2 + -индуцированного, который был полностью подавлен CsA. Стоит отметить, что на этом типе респираторных субстратов Ca2 + вызывал только кратковременную стимуляцию дыхания в покое с последующим сильным угнетением митохондриального дыхания как в этой среде (см., Например, [ 26 ] и ссылки в ней) и в буфере для анализа NaCl (трасса 1). Кроме того, как мы обнаружили ранее [ 11 ], влияние селенита на окислительно-восстановительный статус ПН сильно отличалось не только от влияния Zn2 + или Cd2 +, но и от влияния Ca2 +. В частности, после последовательного добавления 5 мкМ импульсов селенита в среду для анализа KCl не наблюдалось сильного и быстрого снижения аутофлуоресценции PN (устраняемой добавкой CsA в среду), как это наблюдалось после добавления упомянутого выше металла импульсы (5 мкМ - для Zn2 + или Cd2 + и 50 мкМ - для Ca2 +), но наблюдалось умеренное и непрерывное окисление ПН, которое замедлялось только CsA в используемых экспериментальных условиях.

Одновременная запись четырех митохондриальных параметров (дыхание, потоки ΔΨmito, K + и Ca2 +) с помощью O2, TPP +, K + и Ca2 + -селективных электродов после обработки изолированного RLM с помощью Ca2 + в отсутствие (а) или в присутствии CsA ( б). Добавки Ca2 + (50 мкМ) указаны стрелками. Остаток как в.

Что касается действия Hg2 + или Cu2 + на изолированную митохондриальную функцию печени крысы, мы обнаружили в наших предыдущих работах [ 27 , 28 ] что при тех же условиях окисление ПН, нарушение функции дыхания и уменьшение ΔΨmito, вызванные этими тяжелыми металлами, были нечувствительными или слабо чувствительными к CsA. Кроме того, CsA и другие эффекторы пор MPT, включая несколько ингибиторов mtETC, по-разному влияли на набухание митохондрий, вызванное исследуемыми металлами / металлоидами [ 11 ].

3.3. Заключительные замечания

В настоящем исследовании мы обнаружили, что митохондрии клеток асцитной гепатомы крысы AS-30D являются основной мишенью не только для Cd2 +, Hg2 + и Cu2 +, как мы получили ранее [ 9 , 10 ] но также для Zn2 + и селенита натрия. Высокие концентрации мкМ Zn2 + или селенита были сильно цитотоксичны, убивая клетки AS-30D как апоптотическим, так и некротическим путем (Рисунки и). Как Zn2 +, так и селенит вызывали сильные изменения во внутриклеточной генерации АФК (и) и дисфункции митохондрий посредством нарушения mtETC (), диссипации мембранного потенциала (и) и открытия пор MPT ​​(и). Выявлены также существенные различия в токсическом действии Zn2 + и селенита на клетки AS-30D. В частности, селенит индуцировал гораздо более высокий внутриклеточный уровень АФК (раннее событие) по сравнению с Zn2 +, но меньшую потерю мембранного потенциала и меньшее снижение несвязанной частоты дыхания клеток, тогда как нарушение mtETC было ранним и критическим событием в Механизм цитотоксичности Zn2 +.

Важно, что результаты, полученные на интактных клетках, хорошо коррелируют с нашими данными, представленными на изолированных митохондриях. В частности, мы обнаружили, что стимуляция базального дыхания изолированных митохондрий печени крыс, продуцируемых селенитом, была только частично подавлена ​​CsA (). В соответствии с этими результатами наши данные выявлены на клетках AS-30D, а именно, имело место стимуляция частоты дыхания в состоянии покоя и значительное снижение ΔΨmito, обнаруженное уже после 3 ч инкубации клеток с высоким содержанием селенита, что указывает на эффект разобщения металлоида в ранние времена инкубации. Кроме того, CsA частично подавил быстрый и мощный всплеск внутриклеточного образования АФК, обнаруженный в присутствии высокого селенита после 3-часовой инкубации с клетками AS-30D ().

Следует отметить, что до настоящего времени роль соединений Zn и Se в профилактике и возможном лечении рака все еще остается неясной из-за их сложного взаимодействия с клетками и тканями. Тем не менее, много доказательств указывает на прямую токсичность и проапоптотическую активность в отношении злокачественных клеток с добавлением извне Zn2 + [ 6 , 29 - 31 ] или селенит [ 32 - 36 ]. Участие митохондрий и окислительного стресса в различных типах гибели клеток, вызванных Zn2 + и селенитом, было обнаружено ранее [ 37 - 45 ]; однако некоторые авторы все еще выступают против непосредственного участия АФК в механизмах цитотоксичности Zn2 + и селенита [ 8 , 30 , 35 , 46 , 47 ]. Стоит сказать, что в предыдущих публикациях участие «классических» пор MPT ​​(т. Е. Ca2 + -зависимых и CsA-чувствительных [ 21 - 23 ]) в механизме (ах) токсического действия обоих селенитов [ 11 , 34 , 36 , 40 , 47 - 50 ] и Zn2 + [ 6 , 11 , 51 - 56 ] было предложено; однако в настоящее время он находится в стадии обсуждения в некоторых аспектах [ 56 - 59 ]. В частности, есть недавние доказательства, указывающие на возможное участие нерегулируемых пор MPT ​​(то есть, Ca2 + -независимых и CsA-нечувствительных, [ 22 , 60 ]) в механизмах токсичности соединений Se [ 59 ]. Несмотря на наличие данных о профилактическом действии ингибиторов пор MPT, CsA и бонгкрековой кислоты, о диссипации ΔΨmito и высвобождении цитохрома с или AIF, продуцируемых селенитом в различных типах клеток, в литературе в этой области мы не смогли найти доказательств действия CsA на внутриклеточную генерацию АФК изменяется в присутствии этого металлоида. Важно отметить, что в настоящей работе мы впервые провели тщательное сравнительное исследование влияния Zn2 + и селенита на клеточное дыхание. Таким образом, наши результаты не только находятся в хорошем соответствии с данными, полученными другими работниками на различных клеточных линиях в течение многих лет, но и дают новую важную информацию о молекулярном механизме (ах), лежащем в основе Zn2 + - и селенит-индуцированной дисфункции и цитотоксичности митохондрий, в поддержка недавней серии публикаций по этому вопросу [ 61 - 68 ]. Следует также подчеркнуть, что проведенное здесь всестороннее сравнение токсического воздействия металлов / металлоида на изолированные митохондрии и на одну и ту же клеточную линию в одинаковых условиях выявило значительные сходства и различия в механизмах их действия и дало ключ к лучшему понимание роли митохондриальной дисфункции в гибели клеток, что указывает на возможное комбинированное использование этих соединений в противоопухолевой терапии. Этот вопрос сейчас изучается в нашей группе.

Похожие

Некоммерческое тематическое исследование SEO
... изация обратилась к Interactive Cleveland за помощью в поисковой оптимизации"> проблема Местная некоммерческая организация обратилась к Interactive Cleveland за помощью в поисковой оптимизации. Органический поиск был очень малой частью их общего количества потенциальных клиентов. Они знали, что есть возможность расти и захватывать больше потенциальных клиентов в поисковых системах по сравнению с их местными конкурентами, им просто не повезло с прошлыми усилиями и прошлыми консультантами.
SEO и исследование ключевых слов с SEOQuake
SEO и исследование ключевых слов являются важными видами деятельности, которые могут помочь вам занять лидирующие позиции в поисковых системах, а также узнать, на какие ключевые слова ориентируются ваши сайты конкурентов. Существует несколько расширений Firefox, которые помогают в автоматизации исследований, таких как подсчет количества входящих ссылок, плотности ключевых слов, возраста домена, Google pankrank или alexa rank и т. Д., И
Первый сайт Google получает 36,4% переходы (SEO исследование)
Наличие сайта на первой странице Google очень важно, особенно в тройке лидеров, поскольку первые три места получают 58,4 от всех переходов пользователей. Это было показано недавним исследованием Optify (Лидер по развитию маркетинга). Веб-сайты, которые находятся на первом месте в результатах поиска, получают в среднем 36,4 процента кликов (CTR), а на третьем - только 9,5%. Быть на первом месте означает собрать вместе одинаковое количество позиций со второго по пятое.
Google сокращает срок действия экзамена «Основы AdWords» вдвое
Мы только что завершили обновление сертификата AdWords нашей компании на прошлой неделе, сдав экзамен «Поисковая реклама», и ожидали, что он будет сертифицирован Google AdWords до 7 марта 2016 года. Мы были удивлены, когда вошли в систему сегодня утром, что мы больше не сертифицированы. Мы не получили уведомления об этом приостановлении сертификации, и краткий поиск по этому вопросу не дал никаких результатов. Даже Страница блога AdWords
Эксперимент "таблица дивов"
Вместо использования традиционных элементов таблицы HTML также возможно преобразовать структуру элементов вне таблицы в таблицу, используя ARIA. Это эксперимент, и мы явно не рекомендуем использовать его на продуктивных сайтах. Поэтому, пожалуйста, дети, не пытайтесь делать это дома! Таблица делений Как мы видели, можно повторно применить семантику к элементу, который каким-то образом утратил присущую ему семантику. Это
Как проводить исследование ключевых слов с помощью SEMrush Keyword Magic Tool
... именил уникальный подход к исследованию ключевых слов, собрав все необходимые инструменты для исследования ключевых слов, которые когда-либо можно было запросить, в одном месте - Ключевое слово Magic инструмент. Достаточно ввести только одно начальное ключевое слово, чтобы построить вокруг него целую империю ключевых слов. В настоящее время этот инструмент поддерживает 118 стран с общим количеством ключевых слов более 9,4 миллиарда,
Учебник по SEO: исследование и размещение ключевых слов
Методы SEO для людей, которые не имеют доступа к коммерческим инструментам ключевых слов - как исследовать ключевые слова, используя бесплатные инструменты SEO, и размещать выбранные ключевые слова таким образом, чтобы облегчить индексацию и ранжирование в поисковых системах. Эти советы по поисковой оптимизации (SEO) - это то, что я собрал для использования в обучении цифровой журналистике; читатели этого блога могут использовать их в качестве руководства по SEO для повседневной работы
SEO с или без «www» - что лучше?
Если у вас есть доменное имя с или без www для вашего сайта? Что лучше с точки зрения SEO? Каковы преимущества использования www или не www для URL сайта? В чем разница между ними? Как правило, эти вопросы приходят в голову всем при разработке своего сайта. И поэтому я хотел бы обсудить эту тему в своей статье. Начнем с того, какой из них лучше, и я хотел бы сказать вам, что формат www и non-www одинаков для любого обычного пользователя или небольших веб-сайтов. Между ними нет разницы,
Углубленное исследование темы
Как и SEO, сегодня у нас есть много инструментов для проведения исследований и оценки намерений пользователей. В зависимости от ваших потребностей или потребностей вашего клиента у нас есть доступ к сканерам, поиску ключевых слов, проверке рангов и оценщикам работоспособности сайта, таким как Инструменты Google для веб-мастеров. Я избегал использования термина « исследование ключевых слов», так как метод, обсуждаемый сегодня, превосходит исследовательские фразы и может применяться
SEO [Документация BlackCat CMS, учебные пособия, советы и рекомендации]
Общее введение SEO - это аббревиатура от «поисковой оптимизации» и предмет, который вы должны были изучить. : D CMS может помочь только ограниченным, но, по крайней мере, должен предоставить основные варианты. Особенно важен набор из 3 индивидуально сформулированных заголовков страниц , индивидуально форматируемое мета- описание и настраиваемый путь URL . BlackCat CMS предоставляет все три с самой первой версии, которая,
Исследование корреляции рейтинга метрик SEO
... и строить ссылки, мы говорили о необработанном количестве ссылок. Большинству хотелось бы думать, что те времена прошли и что, начиная с Пингвина, качество важнее, чем количество. В результате многие перешли к разговору о количестве ссылок выше определенного показателя - обычно это Domain Authority или TrustFlow. Тем не менее, это полезно только в необработанном измерении количества ссылок, если вы считаете, что метрика говорит вам что-то значимое и сравнительное об этих

Комментарии

Когда в последний раз вы проводили исследование ключевых слов на своем сайте?
Когда в последний раз вы проводили исследование ключевых слов на своем сайте? Расскажите нам в комментариях ниже. Какие советы и рекомендации о том, как провести исследование ключевых слов, вы знаете, что мы не включили сюда? Поделитесь ими с нашими читателями! Джоанн - начинающий копирайтер, одержимый идеей SEO. Любопытство - ее мотивация, любовь и жизнь - ее вдохновение. Она также любит читать художественную литературу и современность так
Как вы прогнозируете исследование и приводите результаты в порядок?
Как вы прогнозируете исследование и приводите результаты в порядок? Наиболее используемая поисковая система в мире возвращает наиболее подходящие результаты для вашего поиска (или, что еще лучше, дает решения по вашему запросу) через сложную систему алгоритмов, сортируя их по баллам, назначенным на основе точных правил, которые необходимо соблюдать . Кроме того, он более или менее упорядочивает результаты верхнего раздела
Исследование дирижера: каковы эффективные заголовки?
Исследование дирижера: каковы эффективные заголовки? Это маркированный список. Набор ресурсов для ответа на вопрос, выраженный в запросе. Несколько исследований (например, Conductor's) подчеркивают эффективность список ставок : это название, которое работает, и я добавляю его в этот список, потому что ему удается согласовать потребности SEO и убедительного веб-копирайтинга. Читать:
Исследование ключевых слов: как вы ищите в Интернете эти темы?
Исследование ключевых слов: как вы ищите в Интернете эти темы? Оптимизация контента: какой контент мы можем создать, который подберет вас? Структурированный процесс необходим для того, чтобы мы могли определять, планировать и реализовывать целевые меры. Определение целевых групп Исследование аудитории (а не исследование ключевых слов) - это начало любой стратегии SEO. В конце концов, если вы не знаете точно, для кого вы оптимизируете, вы не будете
«Какое исследование я бы сделал, чтобы найти этот контент?
«Какое исследование я бы сделал, чтобы найти этот контент?» Эти два вопроса позволяют узнать, какие слова вы должны использовать, чтобы соответствовать вашему контенту, достичь максимального количества людей и, таким образом, ответить на вопрос серфера. Обратите внимание, что можно также использовать бесплатный или платный инструмент, чтобы узнать наиболее нужные ключевые слова и, таким образом, создать его контент и заголовки на основе ранее созданной редакционной линии.
Но как мы можем узнать, какие ключевые слова выбрать, когда мы проводим исследование ключевых слов?
Но как мы можем узнать, какие ключевые слова выбрать, когда мы проводим исследование ключевых слов? Какой тип ключевых слов мы должны использовать, чтобы действительно увеличить наши усилия SEO ? Вы должны использовать разные ключевые слова для таргетинга на разные аудитории на каждом этапе последовательности. Таким образом, вы сможете охватить более широкий круг людей и увеличить ваши шансы на защиту клиента. Прежде чем мы перейдем туда, знаете
Вы проводите исследование ключевых слов?
Вы проводите исследование ключевых слов? Ваша стратегия включает в себя локальное, внешнее и техническое SEO? Ваша стратегия включает контент-маркетинг и ведение блогов на месте? Соблюдаете ли вы правила для веб-мастеров поисковых систем? Используете ли вы различные инструменты, чтобы помочь направить вашу стратегию SEO? Вы адаптируете свою стратегию или добавляете новую на протяжении всей кампании? Как вы в курсе последних изменений
Так что, если вы являетесь поисковым маркетологом из США и у вас есть клиент, имеющий офисы в Мексике или на Карибах, с чего начать исследование цитирования?
Так что, если вы являетесь поисковым маркетологом из США и у вас есть клиент, имеющий офисы в Мексике или на Карибах, с чего начать исследование цитирования? Аналогично, если вы находитесь во Франции и выигрываете клиента с филиалами в Бельгии и Швейцарии, где вы будете искать цитаты? Приведенный ниже список содержит 50 международных сайтов, которые могут служить основой для вашей работы по цитированию ( почти ) в любой стране. Конечно, старательные маркетологи захотят, чтобы
Что такое исследование ключевых слов?
Что такое исследование ключевых слов? Исследование ключевых слов - это анализ данных из многочисленных веб-источников, сервисов и конкурентов, чтобы выяснить, какие ключевые слова являются либо самыми популярными, либо наиболее эффективными словами, используемыми для органических и / или платных источников трафика для веб-сайтов, онлайн-маркетинга и / или рекламы. кампания. Важность исследования ключевых слов Поиск ключевых слов почти всегда должен быть
Что делать, если до меня дошло действие спама от Google?
Что делать, если до меня дошло действие спама от Google? Как я вообще узнаю об этом? Google информирует оператора сайта о поисковой консоли под ключевым словом поисковые запросы и подпункты ручного действия. Если меры были устранены вами, у вас есть возможность запросить повторное обследование. Очень важно отреагировать на наказание и сделать этот запрос, чтобы мера была отменена как можно скорее. Если на вашей странице было размещено слишком много обратных ссылок с
Есть ли у вас какие-либо критические замечания или предложения по улучшению этого руководства по SEO?
Есть ли у вас какие-либо критические замечания или предложения по улучшению этого руководства по SEO? Оставить комментарий.

Если у вас есть доменное имя с или без www для вашего сайта?
Что лучше с точки зрения SEO?
Каковы преимущества использования www или не www для URL сайта?
В чем разница между ними?
Когда в последний раз вы проводили исследование ключевых слов на своем сайте?
Какие советы и рекомендации о том, как провести исследование ключевых слов, вы знаете, что мы не включили сюда?
Как вы прогнозируете исследование и приводите результаты в порядок?
Исследование дирижера: каковы эффективные заголовки?
Исследование ключевых слов: как вы ищите в Интернете эти темы?
Оптимизация контента: какой контент мы можем создать, который подберет вас?

Новости

Сплавы по рекам

Прошлым летом решили хорошенько отдохнуть небольшой компанией, с друзьями. Наша компания любит активный и подвижный отдых. Решили подыскать , что-то интересное и необычное, дабы развлечься по полной.

Где заказать тур на Кипр

Наш мир, в котором мы живём так разнообразен и своеобразен, что если сравнивать различные места нашей планеты, о ни одного из них не будет совпадать по каким-либо данным, характеризующим их. В любой

Специальный держатель для смартфона

Мой муж работает таксистом, и для ориентировки по соседним городам ему нужен навигатор. Но телефон девать некуда, а с сидения или полки его брать неудобно, да и не видно изображения. Любимый не растерялся

Отель «Централь» Официальный сайт 83001, Украина, г. Донецк, ул. Артема, 87
Тел.: +38 062 332-33-32, 332-27-71
[email protected]
TravelLine: Аналитика


Студия web-дизайна Stoff.in © 2008